RESUMO
En la Argentina, la rabia está circunscripta a algunas provincias del norte. La disponibilidad de nuevas vacunas que eliminen la manipulación del virus rábico y que permitan el control de la enfermedad es de importancia estratégica nacional y regional. Las vacunas basadas en poxvirus recombinantes se han utilizado con éxito como vacunas antirrábicas a nivel mundial. SI bien estos sistemas no están disponibles comercialmente, la plataforma de obtención de virus canarypox (CNPV) recombinantes ya ha sido implementada en nuestro laboratorio. El objetivo de este trabajo fue obtener y evaluar un candidato a vacuna antirrábica basado en CNPV recombinantes que expresan la glicoproteína G (RG) del virus rábico (RV). Se construyó un virus recombinante que expresa la secuencia codificante de RG (CNPV-RG). La inoculación de ratones con este virus indujo altos títulos de anticuerpos seroneutralizantes de RV (3,58 y 9,76 Ul/ml después de una o dos inmunizaciones, respectivamente) y protegió al 78 % de los animales desafiados intracerebralmente con RV. Además, se determinó que el CNPV-RG posee una potencia relativa de 3,5 Ul/ml. Los resultados obtenidos constituyen la primera etapa en la evaluación del CNPV-RG como candidato a vacuna antirrábica. Se requerirán nuevos ensayos para confirmar su utilidad en especies de interés veterinario.
In Argentina, rabies is limited to some northern provinces. Availability of new vaccines abolishing the handling of the rabies virus and allowing disease control has regional and national strategic importance. Vaccines based on recombinant poxviruses have been successfully used as antirabic vaccines worldwide. Although these systems are not commercially available, the platform to obtain recombinant canarypox viruses (CNPV) has been previously set up in our laboratory. The aim of this work was the development and evaluation of an antirabic vaccine candidate based on recombinant CNPV expressing the rabies virus (RV) glycoprotein G (RG). A recombinant virus (CNPV-RG) expressing the RG coding sequence was designed. Inoculation of mice with this virus induced high RV seroneutralizing antibodies (3.58 and 9.76 lU/ml after 1 or 2 immunizations, respectively) and protected 78% of intracerebrally RV-challenged animals. In addition, it was determined that CNPV-RG has a relative potency of 3.5 lU/ml. The obtained results constituted the first stage of CNPV-RG evaluation as antirabic vaccine candidate. Further assays will be necessary to confirm its utility in species of veterinary Interest.
Assuntos
Animais , Embrião de Galinha , Cricetinae , Camundongos , Antígenos Virais/imunologia , Vírus da Varíola dos Canários/imunologia , Glicoproteínas/imunologia , Vacina Antirrábica , Proteínas do Envelope Viral/imunologia , Anticorpos Antivirais/biossíntese , Anticorpos Antivirais/imunologia , Antígenos Virais/genética , Chlorocebus aethiops , Vírus da Varíola dos Canários/genética , Vírus da Varíola dos Canários/crescimento & desenvolvimento , Vírus da Varíola dos Canários/isolamento & purificação , Linhagem Celular/virologia , Fibroblastos/virologia , Glicoproteínas/genética , Rim , Mesocricetus , Fragmentos de Peptídeos/genética , Fragmentos de Peptídeos/imunologia , Vacina Antirrábica/imunologia , Raiva/prevenção & controle , Organismos Livres de Patógenos Específicos , Cultura de Vírus , Vacinas Sintéticas/imunologia , Células Vero/virologia , Proteínas do Envelope Viral/genéticaRESUMO
En la Argentina, la rabia está circunscripta a algunas provincias del norte. La disponibilidad de nuevas vacunas que eliminen la manipulación del virus rábico y que permitan el control de la enfermedad es de importancia estratégica nacional y regional. Las vacunas basadas en poxvirus recombinantes se han utilizado con éxito como vacunas antirrábicas a nivel mundial. SI bien estos sistemas no están disponibles comercialmente, la plataforma de obtención de virus canarypox (CNPV) recombinantes ya ha sido implementada en nuestro laboratorio. El objetivo de este trabajo fue obtener y evaluar un candidato a vacuna antirrábica basado en CNPV recombinantes que expresan la glicoproteína G (RG) del virus rábico (RV). Se construyó un virus recombinante que expresa la secuencia codificante de RG (CNPV-RG). La inoculación de ratones con este virus indujo altos títulos de anticuerpos seroneutralizantes de RV (3,58 y 9,76 Ul/ml después de una o dos inmunizaciones, respectivamente) y protegió al 78 % de los animales desafiados intracerebralmente con RV. Además, se determinó que el CNPV-RG posee una potencia relativa de 3,5 Ul/ml. Los resultados obtenidos constituyen la primera etapa en la evaluación del CNPV-RG como candidato a vacuna antirrábica. Se requerirán nuevos ensayos para confirmar su utilidad en especies de interés veterinario.(AU)
In Argentina, rabies is limited to some northern provinces. Availability of new vaccines abolishing the handling of the rabies virus and allowing disease control has regional and national strategic importance. Vaccines based on recombinant poxviruses have been successfully used as antirabic vaccines worldwide. Although these systems are not commercially available, the platform to obtain recombinant canarypox viruses (CNPV) has been previously set up in our laboratory. The aim of this work was the development and evaluation of an antirabic vaccine candidate based on recombinant CNPV expressing the rabies virus (RV) glycoprotein G (RG). A recombinant virus (CNPV-RG) expressing the RG coding sequence was designed. Inoculation of mice with this virus induced high RV seroneutralizing antibodies (3.58 and 9.76 lU/ml after 1 or 2 immunizations, respectively) and protected 78% of intracerebrally RV-challenged animals. In addition, it was determined that CNPV-RG has a relative potency of 3.5 lU/ml. The obtained results constituted the first stage of CNPV-RG evaluation as antirabic vaccine candidate. Further assays will be necessary to confirm its utility in species of veterinary Interest.(AU)
Assuntos
Animais , Embrião de Galinha , Cricetinae , Camundongos , Antígenos Virais/imunologia , Vírus da Varíola dos Canários/imunologia , Glicoproteínas/imunologia , Vacina Antirrábica , Proteínas do Envelope Viral/imunologia , Anticorpos Antivirais/biossíntese , Anticorpos Antivirais/imunologia , Antígenos Virais/genética , Vírus da Varíola dos Canários/genética , Vírus da Varíola dos Canários/crescimento & desenvolvimento , Vírus da Varíola dos Canários/isolamento & purificação , Linhagem Celular/virologia , Chlorocebus aethiops , Fibroblastos/virologia , Glicoproteínas/genética , Rim , Mesocricetus , Fragmentos de Peptídeos/genética , Fragmentos de Peptídeos/imunologia , Raiva/prevenção & controle , Vacina Antirrábica/imunologia , Organismos Livres de Patógenos Específicos , Vacinas Sintéticas/imunologia , Células Vero/virologia , Proteínas do Envelope Viral/genética , Cultura de VírusRESUMO
El presente estudio calculó diferentes MI (Multiplicidad de Infección) para la producción de cultivos industriales de virus de Estomatitis Vesicular (EV) y evaluó el efecto de la cantidad de glicoproteína G en la inducción de respuesta de anticuerpos neutralizantes contra el virus de EV en cobayos inmunizados con una vacuna oleosa bivalente (Indiana (I) y New Jersey (NJ)). Al establecer el MI más eficiente se logró mejorar la cinética de infección de los cultivos industriales disminuyendo los tiempos de cultivo y mejorando los títulos infectantes. Adicionalmente se encontró que títulos de anticuerpos neutralizantes de cobayos inmunizados con vacuna de EV conteniendo aproximadamente 5 microgramos de glicoproteína G de cada serotipo fueron de 3.66 log10 para I y 4.06 log10 para NJ, los cuales se correlacionan con títulos de protección en bovinos. De este estudio se puede concluir que al seleccionar un mejor MI se puede hacer más eficiente el proceso de producción de cultivos virales industriales de EV y que la formulación de una vacuna contra estomatitis vesicular a partir de la cuantificación de la glicoproteína G puede ser una metodología de gran utilidad en la producción industrial de vacunas de buena calidad.
This experiment assess different MI for Vesicular Stomatitis VS virus industrial culture production and evaluated the effect of glycoprotein G concentration in relation to antibodies induction against VS on guinea pigs vaccinated with oil bivalent vaccine (Indiana I and New Jersey NJ). With efficient MI it was possible to get better kinetic of infection at industrial cultures, reducing time of culture and improving viral titers. In addition, it was found that neutralizing titers of guinea pigs immunized with an EV vaccine containing 5 micrograms of glycoprotein G, were 3.66 log10 for I and 4.06 log10 for NJ, which are correlated to protection titers in cattle. About this study can be concluded that selecting a superior MI, efficiency of industrial VE virus production can be improved; on the other hand, glycoprotein G quantification methodology can be useful for a good quality VS Vaccine industrial manufacture.
